无动物源成分PEI转染试剂使用注意事项

时间:2023年10月16日 来源:

线性PEI转染试剂是一种阳离子聚合物,分子量25000,它能与核酸形成复合物,并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广适用于常见细胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。该试剂即使在有血清存在的情况下,它仍然能的将核酸导入细胞。78bio公司提供的线性PEI转染试剂具有如下优点:优越的转染效率,重组蛋白的高表达水平,与含血清的培养基相兼容,低细胞毒性,易于操作?质量控制每批次线性PEI转染试剂均经过转染测试。将eGFP表达质粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞,转染16h后,超过95%的细胞表达eGFP。更多关于PEI转染试剂相关的产品信息,欢迎咨询上海曼博生物!用PEI转染时,一般和DNA的比例是?无动物源成分PEI转染试剂使用注意事项

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瞬时转染方法1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果:在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。上海曼博生物是Polysciences官方授权du jia代理商,更多关于转染试剂相关问题,欢迎咨询上海曼博生物!PolyplusPEI转染试剂转染步骤Polysciences PEI转染试剂怎么样?

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细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都相对较高。有哪些品牌的PEI转染试剂?化学合成PEI转染试剂protocol

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1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。更多关于PEI转染试剂相关产品技术问题,欢迎咨询上海曼博生物。无动物源成分PEI转染试剂使用注意事项

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