温州ChIP免疫沉淀实验原理
时间：2024年06月21日
来源：
染色质免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技术是目前公认的研究此相互作用的选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的技术之一。
它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。
这项技术通过蛋白质与DNA互作来分析目标基因活性以及已知蛋白质的靶基因，被广泛应用于体内转录调控因子与靶基因启动子上特异核苷酸序列结合方面的研究。该技术常与DNA芯片和分子克隆技术相结合。
免疫沉淀和免疫共沉淀的区别？温州ChIP免疫沉淀实验原理
免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验方法基于以下几个关键步骤：
1. 细胞裂解：首先，细胞或组织样本被裂解，以释放细胞内的蛋白质和RNA复合物。
2.抗体特异性结合：裂解后的样本中加入针对特定RNA结合蛋白的抗体。这些抗体能够特异性地识别并结合到目标蛋白。
3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成抗体-蛋白质-RNA复合物。
4. 亲和介质捕获：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获这些抗体-蛋白质-RNA复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下与之结合的复合物。
5. 洗涤：捕获的复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。
6. RNA分离和分析：从珠子上洗脱或消化复合物，分离出RNA，并进行进一步的分析，如qPCR、Northern blot或高通量测序（RNA-Seq）。
北京ChIP免疫沉淀磁珠现货免疫沉淀ChIP技术选琼脂糖珠还是磁珠？
免疫沉淀Co-IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。
Co-IP（免疫共沉淀）技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用，其应用场景如下：
1. 蛋白质相互作用网络的鉴定：Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络，发现目标蛋白的结合伙伴。
2. 信号传导途径的研究：通过Co-IP技术，科学家们发现了许多关键的细胞信号通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。
3. 药物靶点筛选：利用Co-IP技术，研究人员可以筛选潜在的药物靶点。
疾病机制研究：通过分析疾病相关蛋白质的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。
4. 抗体药物开发：Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性，评估抗体药物的亲和力和特异性。
5. 转录因子研究：Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用，进而揭示基因调控网络。
免疫沉淀技术的优缺点？
免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程，并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。
RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体，将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后，可以通过分离纯化，对这些复合物中的RNA进行检测，如qPCR验证或测序分析。
表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注增加。RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA潜能的这一新认识带动了新方法的发展，使研究人员能够定位 RNA-蛋白质相互作用。
免疫沉淀技术RIP的原理是什么？温州蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠免疫沉淀的原理是什么？温州ChIP免疫沉淀实验原理
免疫沉淀实验步骤：
1. 样品制备
a. 悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
b. 贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
4. 后续：磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱
温州ChIP免疫沉淀实验原理
上一篇： 北京支原体去除多少钱
下一篇： 上海免疫沉淀磁珠价格