辽宁GingisREXIdeS蛋白酶蛋白组学

时间:2024年07月02日 来源:

与IdeS不同,为了获得更均匀的度拉糖肽融合蛋白的消化产物,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白质消化该蛋白质,该蛋白由与琼脂糖珠共价偶联的GlySERIAS酶组成。通过将酶偶联到树脂上,可以增加酶与蛋白质的比率,从而可以进一步加速反应,以获得更完整的连接子消化。此外,该酶不会存在于样品制备中,可能会干扰样品分析。为了进行比较,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化过夜,或用GlySERIAS冻干1小时并在37°C下过夜消化。 为了降低样品复杂性,使用内切糖苷酶GlycINATOR冻干去除Fc聚糖,并减少链间二硫键。通过反相LC-MS对样品的分析表明,GlySERIAS Immobilized几乎完全消化了Fc结构域中的连接子,留下了接近均质的Fc/2产物,其中含有来自连接子的一个丝氨酸残基。用 GlySERIAS 冻干 1 小时或过夜消化,两者都会产生几种 Fc 产物,并附着不同数量的丝氨酸和甘氨酸残基。GLP-1肽在所有三个样品中以两种变体存在。使用GlySERIAS固定化消化的均质Fc/2能够详细研究特定于Fc区域的质量属性。此外,在样品中未观察到干扰分析的酶峰。作为补充,Fc/2 产物在用 GlySERIAS 冻干消化后残留部分连接子,有助于研究位于 GS 连接子的修饰。IgMBRAZOR酶能够对复杂和高分子量的人 IgM 进行中级分析,从而促进疫苗诊断等过程中的IgM表征和质量控制。辽宁GingisREXIdeS蛋白酶蛋白组学

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Genovis提供具有低水平内Du素的FabRICATOR(IdeS)冻干酶,用于IgG的铰链以下消化。FabRICATOR(IdeS)是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶,可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体,产生均质的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以冻干粉的形式提供两种不同规格:2000和5000单位,分别用于消化2mg或5mgIgG。该产品配方每瓶的内Du素含量较低,2000单位小瓶的内Du素含量为<0.04EU/瓶,5000单位小瓶的内Du素含量为<0.10EU/瓶。有效消化,内DU素水平低;适用于灵敏的体内或基于细胞的检测。云南GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切QC方法需要执行简单,易于训练,高度可重复,数据易于分析。

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在抗体药物及核酸药物领域,倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程,主要用——RNA转染试剂、生物活性物质纯化分离用填料产品、ADC的payload抗体(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、动物造模用阳性及阴性抗体、泊洛沙姆P 188 Bio、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德国BASF、美国QED、中国君研生物、中国金传生物、中国毫厘科技、中国再帆生物等。这些国产品牌都具有国内自研、自产能力,批次生产稳定可靠、品质可控,为行业发展提供更多国产选择。

与IdeS不同,Romiplostim 由四个相同的血小板生成素 (TPO) 受体结合肽和一个 Fc 片段组成,通过柔性聚甘氨酸序列连接在一起。与度拉糖肽类似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下过夜,或用 GlySERIAS 冻干 1 小时并在 37°C 下过夜消化该蛋白质。 链间二硫键被还原,以便于通过反相LC-MS进行以下分析。与度拉糖肽的观察结果类似,用固定化酶消化产生均质的 Fc/2,剩下一个连接子残基,此处为甘氨酸残基。这有助于识别专门位于Fc区域的修改。用冻干酶消化 1 小时得到 Fc/2,剩余 4 个甘氨酸残基和少量的 Fc/2 仍与一个 TPO 肽连接。另一方面,这使得研究 Fc/2 和第yi个肽之间的连接区域成为可能,而不会受到第二个肽的干扰。用 GlySERIAS 冻干液过夜消化产生 2 个 Fc/2 变体,分别剩下 4 个和 1 个甘氨酸残基。根据消化时间的不同,使用冻干产物释放的肽以五或七种变体存在,接头中残留的甘氨酸残基数量不同,而使用固定化产物释放的肽以四种变体存在。IgMBRAZOR 是IgM 特异性蛋白酶。

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IgA 消化酶的 IgASAP 家族特异性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特异性消化人 IgA1,而 IgASAP Sub1+2 同时消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特异性消化铰链上方的 IgA1 和 IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的 Fab 和 Fc 片段。为了获得纯和完整的Fab片段,使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit进行人IgG1的消化和抗体片段的后续纯化。通过与 GingisKHAN 孵育,然后在 CaptureSelect™ 人 CH1 离心柱上亲和纯化,在曲妥珠单抗上证明了完整的片段生成。样品的酶和Fc部分存在于色谱柱的流通中,Fab很容易通过降低pH洗脱。使用该试剂盒,可以制备 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同时提供IdeS酶的纯化试剂盒。自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险,并提高通量。山东FabRICATOR ZIdeS蛋白酶

FabRICATOR Magic磁珠化IdeS酶切的自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险。辽宁GingisREXIdeS蛋白酶蛋白组学

大多数zhiliao性抗体都携带人IgG1骨架,双特异性和多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性,例如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,这需要优化以极大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的FabDELLO与IdeS酶具有不同的特异性,它在铰链上方的单个位点消化人IgG1,并产生完整的Fab和Fc片段。为了证明FabDELLO的特异性活性,通过非还原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的选择。所有底物均实现了完全消化,包括具有其他困难的LALA和LFLE突变的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精确和有效性能验证了其在生物制药开发中的用途。辽宁GingisREXIdeS蛋白酶蛋白组学

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