慢病毒构建型糖尿病细胞模型功能性验证

Humancelldesign（HCD）通过将永生化转基因hTERT和SV40大T以及单纯疱疹病毒-1胸苷激酶整合基因转移至人胎儿胰腺中，产生EndoC-βH5细胞。扩增后使用CRE ji huo去除永生化转基因，并使用更昔洛韦消除剩余的未切除细胞，所得细胞作为可立即使用的EndoC-βH5细胞进行分发。EndoC-βH5已经成功进行了转录组、免疫学和的功能测定。即用型EndoC-βH5细胞显示出高效的葡萄糖依赖性胰岛素分泌。欧洲四个du li实验室观察并再现了强劲的10倍胰岛素分泌指数。EndoC-βH5细胞响应葡萄糖以动态方式分泌胰岛素。GLP1R和GIPR介导的信号增强葡萄糖刺激EndoC-βH5细胞的胰岛素分泌。在表型上具有和天然胰岛素相同的表达marker。慢病毒构建型糖尿病细胞模型功能性验证

Human Cell Design 根据法国生物伦理立法收集人类胎儿组织，获得法国生物医学局（巴黎）的批准，批准号为 PFS08-005。糖尿病细胞模型应用概括如下：细胞因子介导的糖尿病炎症反应（一/二型糖尿病）：胰岛β细胞保护机制研究，胰岛β细胞炎症反应研究，诱导胰岛β细胞炎症反应化合物筛选；T 细胞介导的胰岛细胞杀伤实验（一型糖尿病）：胰岛β细胞保护机制研究，T 细胞抑制机制，β细胞和 T 细胞作用机制研究。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。通过多轮次优化改良，获得的功能胰腺B细胞，无限接近天然人源胰岛B细胞，其胰岛素分泌功能与天然细胞类似，基于PDX1/NKX6.1关键基因验证的细胞均一性达到90%以上（左图），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖剂量下表现出10倍的胰岛素分泌反应（右图），对GLP-1R激动剂， Exendin4刺激产生明细那反馈， 且可实现批量化生成，实现稳定供应。糖尿病炎症糖尿病细胞模型糖尿病研究新靶点糖尿病细胞模型人源胰岛B细胞已经进行了功能性验证。

根据啮齿动物β细胞获得的数据，葡萄糖转运蛋白SLC2A2头次被认为是葡萄糖传感器蛋白。SLC2A2在人胰岛细胞中的表达水平极低，表明葡萄糖在大鼠β细胞中通过SLC2A2转运，而在人β细胞中主要通过SLC2A1和/或SLC2A3转运。研究表明SLC2A2mRNA在EndoC-βH1细胞中表达，因此，EndoC-βH1细胞应该是一个有用的模型，用于解剖不同葡萄糖转运体在人β细胞中的特定作用。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。

Human Cell Design 成立于 2001 年，总部位于法国，专注于人源细胞模型开发，以助力科研和生物医药企业的发展。其中可作为糖尿病细胞模型的 EndoC-BH5、EndoC-BH3、EndoC-BH1 等人源胰岛 B 细胞为其优势产品，这些人源胰岛 B 细胞诱导产生的胰岛素接近于天然胰岛细胞分泌的胰岛素量。人源胰岛 B 细胞模型构建技术性文章早期发表于 2011 年，相关文章总引用量达到 600+，人源胰岛 B 细胞模型已经被全球 200 多家生物医药和生命科研机构作为糖尿病细胞模型使用。糖尿病细胞模型—EndoC-BH5 细胞是 EndoC-BH 细胞家族中的较新细胞。

Humancelldesign（HCD）开发了一种用于在人类胎儿组织中使用靶向Zhong Liu产生功能的人类β细胞系。在胰岛素启动子的控制下，用表达SV40LT的慢病毒载体转导人类胎儿胰腺芽。然后将转导的芽移植到SCID小鼠体内，使其发育成成熟的胰腺组织。分化后，新形成的表达sv40lt的β细胞增殖并形成胰岛素瘤。然后用人端粒酶逆转录酶(hTERT)转导β细胞，移植到其他SCID小鼠体内，在体外扩增生成细胞系。其中一种细胞系，EndoC-βH1，表达了许多β细胞特异性标记，而没有任何其他胰腺细胞类型标记的实质性表达。在葡萄糖或其他胰岛素分泌剂的刺激下，细胞分泌胰岛素，细胞移植逆转了化学诱导的小鼠糖尿病。在 糖尿病细胞模型EndoC-BH5 细胞中检测到所有对 B 细胞身份和功能重要的转录因子的表达.慢病毒构建型糖尿病细胞模型功能性验证

糖尿病细胞模型可用于脂毒性胰岛B细胞测试。慢病毒构建型糖尿病细胞模型功能性验证

在胰岛细胞刺激中，基础和高D-葡萄糖条件之间的刺激指数为11.6±1.8。通过应用不引起胰岛素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻断D-葡萄糖诱导的钾通道开放剂二氮嗪(100mM)，验证了胰岛素分泌对D-葡萄糖的特异性。胰岛素分泌以D-葡萄糖浓度依赖性方式增加，从0mMD-葡萄糖时的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖时的679.2±39.5ng/h/10⁶细胞。胰岛素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖，分别有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/10⁶细胞。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。通过多轮次优化改良，获得的功能胰腺B细胞，无限接近天然人源胰岛B细胞，其胰岛素分泌功能与天然细胞类似，基于PDX1/NKX6.1关键基因验证的细胞均一性达到90%以上（左图），在2.8 mM and 11 mM葡萄糖剂量下表现出10倍的胰岛素分泌反应（右图），对GLP-1R激动剂， Exendin4刺激产生明细那反馈， 且可实现批量化生成，实现稳定供应。慢病毒构建型糖尿病细胞模型功能性验证