链特异性建库

通过高效的桥式扩增和同步测序技术，Illumina测序平台可以实现快速、准确、高通量的DNA和RNA测序，广泛应用于基因组学、转录组学、表观遗传学等领域的研究和应用。除了桥式扩增，同步测序是Illumina测序技术中另一个重要的步骤。在同步测序过程中，Illumina平台同时进行多个DNA片段的测序操作，实现了高通量测序的能力。随着测序技术的不断发展和完善，相信Illumina测序技术将继续在基因组学、转录组学等领域发挥重要作用，推动生命科学研究取得新的突破和进展。真核无参转录组测序技术将越来越注重单细胞水平的研究。链特异性建库

在真核有参转录组测序中，基因表达的差异分析主要有以下几种方法：倍数变化法（FoldChange）;统计学检验方法;基于模型的方法；非参数检验方法；贝叶斯方法；聚类分析；基因集分析;差异表达分析软件;例如，在研究某种疾病与正常组织的基因表达差异时，可以使用 t 检验来比较两组样本中各个基因的表达量，筛选出差异的基因；或者利用基因集分析来查看与疾病相关的通路中基因的整体表达变化情况。这些方法的综合运用可以更、准确地揭示基因表达的差异及其背后的生物学意义。链特异性建库真核无参转录组测序正逐渐成为一项关键技术，为我们开启了探索没有参考基因组的真核生物基因奥秘的大门。

RNA-seq在可变剪切和SNP分析中的应用可变剪切分析：RNA-seq可以揭示基因的可变剪切形式，了解不同剪切 isoform 的表达情况和功能。SNP分析：通过RNA-seq数据可以鉴定个体间或不同组织之间的SNP变异，了解SNP在基因表达和调控中的作用。RNA-seq在新转录本发现中的应用新转录本发现：RNA-seq可以发现未知的转录本，对于了解基因的多样性和功能提供了重要信息。转录本差异表达分析：通过RNA-seq可以发现不同组织或条件下的转录本差异表达情况，揭示特定转录本的功能和调控。

随着科学研究的不断深入，人们对基因结构和功能的理解也在不断深化。在这个过程中，短读长测序平台逐渐暴露出一些局限性。虽然它能够提供海量的数据，但在面对一些复杂的基因结构问题时，往往显得力不从心。例如，对于一些具有高度可变剪接、长链非编码RNA以及复杂的基因融合等情况，短读长测序的数据可能难以准确解析。正是在这种背景下，长读长（long-read）RNA-seq的出现犹如一道曙光，为解决这些难题带来了新的希望。长读长RNA-seq的进步使得我们能够更准确地研究基因结构。与短读长测序不同，长读长测序能够产生更长的序列片段，从而能够跨越整个基因甚至更大的基因组区域。链特异性转录组帮助我们追踪基因在胚胎发育过程中的动态表达。

RNA-seq技术的主要步骤包括：RNA提取：首先从待测样品中提取总RNA，通常采用TRIzol法或商用RNA提取试剂盒进行RNA提取，保证RNA的纯度和完整性。cDNA合成：通过逆转录（reverse transcription）反转录RNA为cDNA，接着合成双链cDNA。文库构建：对双链cDNA片段进行末端修复、连接连接器（adapter）序列，形成文库。测序：将文库片段建桥、扩增后通过二代测序平台进行高通量测序。数据分析：对测序得到的数据进行基因定量、差异表达基因分析、可变剪切和新转录本的分析等。真核无参转录组需要运用先进的算法和工具来对测序数据进行组装、注释和分析，以提取有价值的信息。全转录组测序

链特异性转录组学通过区分正义链和反义链转录本，发现更多的反义转录本。链特异性建库

RNA测序（RNA-seq）自诞生起就应用于分子生物学，帮助理解各个层面的基因功能。RNA-seq技术的出现，使得我们能够、准确地研究转录组，并从中获得丰富的信息。在RNA-seq中，常用的分析方法之一就是差异基因表达（Differential gene expression, DGE）分析。通过对不同条件下的样本进行RNA测序，我们可以找出不同基因在不同条件下的表达水平变化，从而发现潜在的生物学意义或研究靶点。DGE分析的重要性和应用，自从诞生以来，虽然在方法和工具上有所改进，但其基本原理和方法却从未发生实质性的改变。链特异性建库