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细胞转染的注意事项：细胞状态这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于较佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。细胞复苏后的3代左右时细胞状态较好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化。大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。或者，几种来源于经筛选，转染效率较高细胞亚系的细胞系现在有售~一类是瞬时转染，一类是稳定转染（很长转染）。武汉细胞高效转染试剂厂家现货

瞬时转染和转染效率的监测：基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。可以使用报告基因来确定优化条件，其表达蛋白易检测，在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMVSPORT-bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。天津正规细胞高效转染试剂平均价格瞬时和稳定表达DNA转染后，转入基因的表达可以在1－4天内检测到。

转染的注意事项：培养基中的物品物品，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用物品，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些物品是GENETICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外，为了保证无血清培养基中细胞的健康生长，使用比含血清培养基更少的物品量。大多数已建立的细胞系都是非整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化，这会导致和转染相关的细胞行为的变化。如果随时间发现这种变化，融化一管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。比如，新鲜融化的NIH3T3细胞比传代8次的细胞表现出更高的转染效率，融化细胞的进一步传代并没有降低转染效率。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果

细胞转染常用步骤：1.转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2.选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。3.将混合液在室温放置10―15分钟。4.吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。5.加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。6.到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。建议选择50%~80%区间密度进行细胞转染。

细胞转染效率影响因素：1.细胞密度一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。2.细胞生长状态这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。3.细胞种类不同细胞种类的细胞在做转染时所需要的转染体系是不同的，不能一种体系用在所有类型细胞的转染实验。操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。合肥正规细胞高效转染试剂平均价格

细胞转染是完成这一过程的必需步骤。武汉细胞高效转染试剂厂家现货

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