深圳单细胞BCR测序分析

时间:2022年06月03日 来源:

二代测序技术在测序方法上取得了重大突破,基于“边合成边测序”(sequencing by synthesis)和大规模平行测序技术(massive parallel analysis,MPS),使测序通量和读取速度得到极大提升,烈冰生物斥巨资购置的Novaseq6000测序仪的测序原理可以简化为四步:样品文库构建、簇生成、测序和数据分析。由于读长限制,样品DNA或由RNA逆转录得到的cDNA需要被打断成300-500bp的片段,并在3'和5'端接上3种序列:1)Index,用于区分样品来源;2)Adapter,用于结合测序通道上的位点;3)Primer binding site,用于结合PCR引物启动扩增反应。高通量测序技术是对传统测序一次翻天覆地的改变,一次对几十万到几百万条核酸序列进行测定。深圳单细胞BCR测序分析

不同类型的细胞或者在不同的条件下,活细胞中染色质的结构是在不断变化的,比如说各种应激反应(stimulus response)和抗逆反应(stress response)等,也就是说染色质的可及性是会随细胞类型和外界刺激的改变而发生变化,而染色质开放区域的定向测序可以帮助我们了解细胞的转录调控过程,确定开放染色质的位置、转录因子的调控差异、核小体的调控区域和染色质状态等信息,确定哪些基因在细胞中具有转录活性。单细胞多组学测序是一种比较强大的表观遗传学研究工具,在开放染色质图谱绘制,细胞分化发育,疾病的致病机制,样本微环境等方面具有极大的应用前景。北京PanoCell单细胞测序价格强势发文!烈冰单细胞测序助力揭示愈伤组织能再生的机制。

当蜂巢孔内同时落入细胞和磁珠后,接下去可以往BD Cartridge板中加入细胞裂解液对细胞进行裂解,使细胞内的RNA与磁珠上的标签进行结合,完成每个细胞内RNA的捕获和标记。这时,再将捕获了RNA的磁珠进行回收,待所有质控结果确认通过后就可以进行后续的RNA反转录、cDNA第二链合成等实验操作。而BD Cartridge板则需要再进行一次成像,获得磁珠收集后的扫描图,判断磁珠是否已经被有效收集。根据每一步的质控结果,烈冰科技(NovelBio)单细胞测序实验团队会根据单细胞分选的实验结果生成实验总结报告,判断每一步骤是否通过质控,并得到捕获的单细胞数量以及双细胞比例,对整个实验进行总结评估。若所有过程通过质控,实验样本即可进行下一步实验操作。

当下,单细胞测序已经广泛应用于多种疾病发展过程中的关键过程和事件,如疾病从轻症病变向恶性的转化、恶性向转移病变的发展,以及疾病对多种药物的反应等等。单细胞测序技术作为一个需要将组织解离成为单细胞悬液,或者是采用细胞核捕获的策略捕获单细胞核,进而对于每一个单细胞或者细胞核进行测序得到结果的技术,其空间定位信息是丢失的。这就衍生出了一个问题就是如果单细胞A与B并不出现在一个组织区域中他们会互相影响或者转化么?免疫研究中,两个具有非常强的PDL1-PD1的配对关系的细胞在组织切片上风马牛不相及,这样PDL1-PD1的关系会生效么?单细胞测序因其强大的探究疾病--细胞--基因的关系,一度成为高通量测序技术的“天花板”。

单细胞获得困难,不同组织要求不尽相同难以搞定? 烈冰2000+项目消化经验,100+组织类型解离protocol,精心设计不同组织实验的解离、细胞悬浮实验体系,确保单细胞的获得。 冻存样本无法实验,珍贵样本无法使用? 烈冰采用国际认可的冻存组织复苏技术以及死细胞过滤技术,确保冻存组织使用。 珍贵样本,细胞数量太少,消化背景杂无法做单细胞? 采用国际认可的10X Genomics,BD Rhapsody双平台模式,根据样本实际情况和用户需求提供客观有效的实验方案,细胞量少,背景杂也能做单细胞。 PCR Bias干扰基因表达? 采用BD单细胞UMI Barcode技术构建PCR无偏文库,克服扩增偏差,更准确地计算转录水平。 单细胞RNA分类精度不足,部分细胞无法细分? 烈冰同时采用单细胞蛋白质组与单细胞转录组测序技术,真正做到从上游到下游的全线检测,确保超高的细胞分类精度。个性化制定测序项目方面,满足从检测基因到蛋白的多组学测序要求。单细胞免疫组库测序分析

ATCG碱基的排列组合构成了测序的庞大世界。深圳单细胞BCR测序分析

基于10X Geomics 动态微流控技术,利用Tn5转座酶酶切开放染色质,形成短片段,单细胞ATAC测序在表观基因组学水平上,揭示单细胞染色质的可及性问题,区分细胞异质性,获得开放染色质的位置、转录因子的结合位点、核小体的调控区域和染色质状态等信息,是单细胞表观遗传学的重要突破:分析每个细胞数千个独特的染色质开放区域,识别细胞类型和细胞状态;识别重要的转录因子,进行谱系和发育追踪;探究驱动细胞类型和状态之间基因表达差异的非编码序列;探究细胞类型特异性和基因调控网络特征等。是当前重要的多组学研究基因表达和表观遗传学的手段。深圳单细胞BCR测序分析

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