上海10X Chromium X单细胞测序平台

时间:2022年08月08日 来源:

RNA测序(RNA-seq)或芯片分析等大量样本的转录组学方法作为一类强大的工具,可提供混合样本的基因表达平均数据,帮助科学家开始揭示这种异质性。随后,技术创新的飞跃在单细胞技术上达到新高度——使得科学家能够定义细胞类型特异的基因表达,从过去的平均数据中分辨出真正驱动其表达模式的细胞异质性。这让研究人员能够更详细地表征组织异质性,鉴定稀有细胞类型,并逐个细胞地仔细分析其分子机制。当获得了对其研究的生物系统更为真实的图谱后,研究人员就有了更为坚实可靠的知识基础,并能在这个基础上规划下一步实验,以获取更深入的可行动见解。烈冰一站式单细胞测序服务:立足科学研究,解码生命本质。上海10X Chromium X单细胞测序平台

一味的追求高细胞数量的捕获,小心得不偿失,原因在这:单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行,而细胞聚类是在区分cell和non-cell后,获得细胞基因表达谱,通过降维(pca),无监督聚类以及可视化(t-SNE)得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式,因此即使是相同的数据,在剔除几个细胞的情况下,前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时,无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据,都会对正常细胞聚类产生影响,造成聚类结果失真。这也是很多文章,特别是很多高分文章,为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时,数据量在100G左右时,可以满足分析和文章发表的多重需求。成都二代测序单细胞测序商业化服务单细胞测序技术的迅速发展和应用推广,为从多维度揭示疾病发展提供了强有力的工具。

针对样本活性的问题,10×Genomics官方建议当单细胞悬液活性低于70%时应做去除死细胞操作,但也需要注意到,去除死细胞的操作会损失一定的细胞数量,10×Genomics和MiltenyiBiotec都没有给出单细胞悬液含有多少细胞数量才建议做去除死细胞的操作。基于烈冰多年单细胞测序实验经验,建议当细胞悬液进行质量和活性检测后,考虑对细胞活性在50%-70%的悬液进行去除死细胞的操作。而太低活性的悬液(小于30%),悬液中细胞大量死亡,可能已经丢失了原组织内的细胞比例和状态,失真严重,建议重新收集样本进行新的实验,保证数据的高质量和实验结果的准确性。

单细胞测序结果动辄上百G数据量,庞大的数据对于分析平台和分析能力有着很高的要求,首先针对下机数据的质控环节:单细胞测序产生数亿的结果序列,不可避免的会出现低质量的测序结果,存在各种情况的序列污染。因此序列过滤及质量评估就会变得极为重要。序列质量主要通过测序质量值Q20/Q30的占比来表征,即碱基测序结果的错误率在1%/0.1%以下的比例。理想的测序结果reads的碱基质量均高于30。保证数据获得后的处理结果的准确性,为后续细胞类型鉴定和功能分析打下坚实基础。个性化制定测序项目方面,满足从检测基因到蛋白的多组学测序要求。

单细胞获得困难,不同组织要求不尽相同难以搞定?烈冰2000+项目消化经验,100+组织类型解离protocol,精心设计不同组织实验的解离、细胞悬浮实验体系,确保单细胞的获得。冻存样本无法实验,珍贵样本无法使用?烈冰采用国际认可的冻存组织复苏技术以及死细胞过滤技术,确保冻存组织使用。珍贵样本,细胞数量太少,消化背景杂无法做单细胞?采用国际认可的10XGenomics,BDRhapsody双平台模式,根据样本实际情况和用户需求提供客观有效的实验方案,细胞量少,背景杂也能做单细胞。单细胞RNA分类精度不足,部分细胞无法细分?烈冰同时采用单细胞蛋白质组与单细胞转录组测序技术,真正做到从上游到下游的全流程检测,确保超高的细胞分类精度。单细胞测序是高通量测序下的又一重大技术突破。单细胞测序百万通量平台

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烈冰生信团队倾情研发的NovelBrain®生信大数据分析平台,针对庞大的单细胞测序数据,能够实现细胞类型鉴定的快、精、准:一键导入genelist构建个性化基因列表;轻松一点即可展示Marker基因的Featureplot;任意修改Cluster的颜色和名称助力高效鉴定细胞类型;一键获得t-SNE图、Heatmap和Violin图:轻松获得并下载基因表达的t-SNE图、Heatmap、Violin图,还可以通过调节宽、高和系数比例来调节美观。平台上线300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板,帮助烈冰生信分析团队和自主分析用户实现分析工具和模板的快速调用和一站式全流程自动化分析,节省工作时间并提升整体工作效率上海10X Chromium X单细胞测序平台

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