微生物高通量测序NGS

生工靶向捕获测序，项目介绍：利用序列捕获技术将基因组特定区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析方法。全外显子测序即通过对某一基因组中的所有外显子进行测序从而获得所有外显子区域内的突变信息。由于该技术在临床上的潜力，被《科学》杂志评为2010年科学进展之一。外显子组测序可用于寻找单基因疾病、复杂疾病（如糖尿病、肥胖症等代谢综合症）、甚至是cancer的致病基因或易感基因。生工生物采用Aglient SureSelect系列外显子捕获系统，可以高效富集人全外显子区域，并结合Illumina XTen测序平台进行深度测序。后期可以完成SNP/InDel/CNV等变异检测，形成完整的分析报告。10xGenomics Chromium X多通道+高捕获+10x的CellPlex多样本混样技术。微生物高通量测序NGS

转录组测序，项目介绍：RNA-Seq，是基于新一代测序技术的转录组学研究方法：首先提取生物样品的全部转录的 RNA 并进行 mRNA 富集，然后反转录为 cDNA 后进行新一代高通量测序，在此基础上进行短片段拼接组装，从而获得一个个单独转录本，进而可以对该生物样品当前状态的基因表达状况有全局了解。对不同阶段或部位生物样品的转录组进行 比较分析，则可以在转录层面得到基因表达水平的变化，针对关键基因则可以进行代谢通路（Pathway）的构建。微生物高通量测序NGSDNA样品请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。

台盼蓝染色原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。

通过显微镜使用血球计数板质检得到质检结果：明场（细胞未染色）：主要可以观察悬液背景质量（背景干净，无杂质碎片，无细胞团块）；台盼蓝场（细胞与台盼蓝染色后）：主要可以观察活性（主要为活细胞，未染色蓝色的为活细胞）；通过台盼蓝场计算活率：90%>80%；细胞浓度:710cells/µl;等结果来看，血球计数板质检结果的展示可以看出所有指标均符合上机标准，属于高质量单细胞悬液。

真核/原核无参mRNA-Seq，项目介绍；测序使用Illumina Xten平台，测序原始数据质控后进行拼接，并进一步对拼接所得转录本进行功能注释、CDD、CDS分析，SNP分析，SSR标记开发等分析。在计算基因的表达量后，进行基因表达差异及差异基因GO、KOG（原核生物为COG）、KEGG功能富集分析，KEGG pathway等分析。对于多个样本，可进行重复相关性检查、共表达分析、PCA主成分分析。另外，还可以进行基因功能互作、蛋白网络互作等分析，深入研究基因功能，进一步揭示基因间互作网络等信息，为研究网络调控机理提供方向。 对于需要进行RNA抽提的部分特殊样品，可以将组织在液氮中研磨后用TRIzol悬浮后用普通冰袋寄送。

单细胞悬液质检方法，在进行单细胞悬液质检时，需要用到以下两大质检利器的辅助：荧光细胞计数仪（主要使用台盼蓝和双荧光AO/PI染色法）进行质检。首先我们先要了解一下细胞质检时染料染色的原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。荧光细胞计数仪检测结果可以让我们直观的看到：细胞浓度（总细胞，活细胞，死细胞）、细胞存活率（台盼蓝和双荧光AO/PI染色）、细胞平均直径、细胞聚团率、细胞直径分布等结果的展示。请提供电泳胶图，浓度>20 ng/μl，总量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或冻干DNA，可冰袋运输，不超过3天。上海市ITS高通量测序测序

在运输前将所有样品管固定于50 ml带盖离心管中，再将50 ml管放在封口袋中。微生物高通量测序NGS

细胞质检时染料染色的原理：台盼蓝染色原理：台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不被染色。而死细胞的细胞膜透性增高，可使染料进入细胞内而使死细胞染成淡蓝色。AO/PI染色原理：吖啶橙（AO）是一种小分子染料，可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；碘化丙啶（PI）只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光，通过标记出的绿色荧光和红色荧光就可以辨别出活细胞和死细胞，这种特异性染色的方法也可以排除无核细胞、杂质、碎片等的干扰。微生物高通量测序NGS

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