上海Opti-MEM转染试剂配制

时间:2022年06月17日 来源:

在难转染细胞(原代大鼠动脉平滑肌细胞)转染效率的比较

图片由芝加哥大学肺和重症护理系的 Nickolai Dulin 博士友情提供

制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用 LipoD293™试剂(左图)和 Lipofecatmine 2000(L2K, 右图)分别将 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染 24 小时后,用尼康 Eclipse 2000 荧光显微镜检测 GFP 荧光,以此来评价转染效率。

对难转染细胞 LNCap 细胞转染效率的比较

图片由罗斯威尔公园**研究所(Roswell Cancer Institute)的 Lyn Gao 博士友情提供



惊艳登场!临床级载体生产必备转染试剂。上海Opti-MEM转染试剂配制

对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的cDNA(phRL-CMV)和绿色荧光蛋白GFP的cDNA按照生产商的提供的转染步骤分别转染到CHO细胞。在转染24小时后,荧光素酶的活性使用Beckman公司的化学发光监测器测定;GFP阳性细胞率使用BD公司的FACS检测。左图:LipoD293试剂(升级版)和Lipofecatmine2000(L2K),TransIT以及Fugene6的价格比较(美元/1000微升)。所有的价格是从生产制造商的网站上收集对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧体内转染试剂盒转染是将核酸导入真核细胞中的过程,是细胞生物学、基因表达和基因***实验中的关键步骤。

基于磷酸钙成分的转染试剂,其主要作用原理是与DNA通过沉淀反应形成磷酸钙-DNA复合物,粘附到细胞膜表面,借助内吞作用进入细胞质。pH值,钙离子浓度,DNA浓度,沉淀时间,细胞孵育时间乃至各组分加入顺序都可能对结果产生影响,因此实验条件摸索和优化时间较长,且重复性不佳。基于脂质体的转染试剂包括中性脂质体和阳离子脂质体两种。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA,借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。目前应用比较***的是带正电的阳离子脂质体转染试剂,DNA并没有预先包埋在脂质体中,而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上,形成DNA-阳离子脂质体复合物,从而吸附到带负电的细胞膜表面,经过内吞被导入细胞。此方法操作简单,重复性好,在体外转染中有很高的效率,但具有一定的细胞毒性,可能会干扰细胞的代谢。且活性受血清影响,需要去除血清。

用LipoFectMax™转染Hela细胞,左图转染GFP cDNA,右图共转染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。转染siRNA后可以从右图明显看到基因沉默。

4适用于神经细胞的转染图4.  用LipoFectMax™ 和LipoFectamine®2000分别对小鼠神经元细胞进行转染绿色荧光白蛋白(GFP),转染24小时后观察转染效果,LipoFectMax™ 转染效率(左图)比LipoFectamine®2000(右图)高5倍。

LipoFectMax™ 转染试剂转染试剂操作流程

细胞毒性低图2.LipoFectMax™ ,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分别对A549细胞进行转染操作,通过计算转染后的细胞存活率比较细胞毒性。 无论有无血清、***存在均可获得很高的转染效率。

细胞转染过程X-tremeGENE9DNA转染试剂简介:X-tremeGENE9DNA转染试剂是脂质和其它成分混合而得的一类多组份试剂,溶于80%乙醇中,经0.2μm滤膜过滤,然后封装于玻璃小瓶中,适用于细胞分析的多种实验。优势:1.具有细胞毒性极低、转染后细胞存活率高,生成可信任的生理学相关数据。2.操作简便、节省时间,只需对X-tremeGENE9DNA转染试剂进行简单稀释,再与质粒DNA共同孵育,即可直接向细胞添加反应混合物(有无血清均可)。3.对于常用细胞无需进行费时费力的优化工作.世界上低价的细胞转染试剂PEI,这里有**详细的操作步骤!悬浮细胞转染试剂推荐

随后分离血清并检测FVII蛋白的水平(Biophen 显色检测)。上海Opti-MEM转染试剂配制

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