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胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要！！当然也要保证细胞状态特别好，没有细微污染，铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦！载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统，当然使用三质粒系统的小伙伴居多，一定要选择成熟商业化的载体系统！载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失，或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯：建议目的基因载体和阴性对照GFP载体是同一批，且建议每次包装都如此操作，要保证目的基因的表达载体构建纯化良好，质粒间比例得当，并且对质粒进行酶切验证。用于siRNA的转染试剂，还有通用型转染试剂Lipofectamine™.上海阳离子聚合物转染试剂供应商

在难转染细胞（原代大鼠动脉平滑肌细胞）转染效率的比较图片由芝加哥大学肺和重症护理系的NickolaiDulin博士友情提供制备大鼠的动脉平滑肌原代细胞并用使用LipoD293™试剂（左图）和Lipofecatmine2000（L2K,右图）分别将GFP的cDNA（pEGFP-N3）按照生产制造商的转染操作步转染至该细胞。转染24小时后，用尼康Eclipse2000荧光显微镜检测GFP荧光，以此来评价转染效率。对难转染细胞LNCap细胞转染效率的比较图片由罗斯威尔公园**研究所（RoswellCancerInstitute）的LynGao博士友情提供罗氏转染试剂将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中，前后移动培养皿，混合均匀；

图7.对注射了Invivofectamine3.0试剂的小鼠样品进行血液化学分析。将Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的复合物分别以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未处理[U]的剂量注射入小鼠体内。在注射后2、24及48小时收集血液样品，并通过临床化学检测方法对数个生物标志物(Antech)进行评估。结果表明在使用Invivofectamine3.0试剂进行转染的每个个体间所检测的生物标志物的水平与未注射该试剂的个体相比并没有***差异。除了以上两种于siRNA的转染试剂，还有通用型转染试剂Lipofectamine™2000，Lipofectamine™3000和Neon™转染系统也可以用于siRNA转染

简介：X-tremeGENEHPDNA转染试剂是一种高效的无动物源成分的低毒转染试剂，兼容含血清或不含血清的培养基，可用于转染各类真核细胞(包括昆虫细胞)以及多种难转染细胞系。优势：1.简单易用的多组分混合试剂，无动物源性成分，室温稳定。2.高转染效率，对于原代细胞和使用其它试剂难转染的**细胞系有高转染效率。3.使用细胞毒性低的试剂，结果相关性好.图2.X-tremeGENEHP高效低毒的转染性能。通过X-tremeGENEHP和脂质体转染方法将GFP表达质粒转染至CHO-K1。A和C图的荧光视野显示了实验后两种方法均获得了成功转染的细胞。但B和D图的明亮视野表明脂质体转染方法的细胞毒性远高于X-tremeGENEHP，导致存活细胞量减少(图片来源于网络).原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖.

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在多种不同类型细胞中基因敲除效率超过90%。2.高灵活应用，同一试剂可用于siRNA和质粒共转染的基因沉默实验。3.细胞毒性低，结果相关性好，确保所观察到的细胞效应是由转染的siRNA而非转染过程本身介导。4.兼容含血清或不含血清的培养基，转染前后均无需换液(如无血清培养基)。图4.X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4种细胞系的HPRT基因沉默实验。根据各试剂说明书建议的操作流程，或标准实验方法，将100nMHPRT特异性siRNA转染至4种细胞。通过LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的荧光定量法评估基因沉默效率。结果显示用罗氏这款试剂在四种细胞中转染后基因沉默表现均表现优异。上海阳离子聚合物转染试剂供应商

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