浙江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

Genovis的PNGase F 是一种糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺与所有哺乳动物天冬酰胺连接复合物、杂交体或高甘露糖寡糖的内层 GlcNAc 之间的酰胺键。 在反应过程中，从中去除聚糖的天冬酰胺残基被脱酰胺为天冬氨酸。释放的低聚糖完好无损，可用于进一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的样品制备，以降低蛋白质的异质性，使游离的糖分析成为可能，并研究N-糖的功能作用。 该酶在大肠杆菌中表达，该重组基因来源于伊丽莎白金氏脑膜败血症。 评价抗体片段对完整蛋白聚集的影响。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生产。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦双触角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。水解ɑ2-3-连接唾液酸的冻干酶SialEXO 2-3，装在500个单位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。浙江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率（图3）。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽，而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具选择性的氨基酸序列偏好，此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外，ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解，如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品（T184-S199和T200-H204;图2b和d），而在ImpaRATOR消化的样品中，具有漏裂的相应肽（S184-H204）的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率，但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构，包括唾液酸化物种。例如，条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较，在OpeRATOR中，必须去除唾液酸才能产生酶活性，这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。河北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物药物开发倍笃生物代理多条产品线，用于聚糖分析用酶、ADC偶联技术、QED抗体对、AAV中和抗体、IdeS蛋白酶等。

GlycOCATCH®亲和纯化：用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽亲和纯化的富集树脂。GlycOCATCH亲和纯化以方便的离心柱形式提供。该产品包含：4 个 GlycOCATCH 亲和纯化微离心柱，每个柱能够结合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白（总共 200 μg）。Genovis的SialEXO 冻干 200 单位，用于去除唾液酸；OpeRATOR 冻干 200 单位，用于结合的 O-糖蛋白的可选洗脱方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集；2. 复杂样品的特异性净化；3. 用于改进 MS 分析的样品制备。O-糖基化蛋白和肽的特异性富集：O-连接聚糖参与多种生物过程，包括抑制病原体引起的gan染、炎症反应、造血和细胞信号传导。

用于糖蛋白去唾液酸化的冻干酶混合物。Genovis的SialEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中，用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-连接唾液酸的冻干酶。 Genovis的SialEXO 2-3冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在500个单位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 与唾液酸酶混合物 SialEXO 相比，SialEXO 2-3 是一种 α2-3 特异性唾液酸酶，允许对 α2-3 连接的唾液酸进行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小时内实现。OglyZOR 是一种内切糖苷酶，可特异性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖；

用于水解β1-3,4-连接半乳糖的固定化酶在离心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的水解，而不会用酶污染z终制剂。Microspin 色谱柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. z终样品中不含酶。GalactEXO 酶来源于 Akkermansia muciniphila 并重组表达，可有效水解 β1-3 和 β1-4 连接的半乳糖。GalactEXO微离心柱经过格式化，可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。使用OpeRATOR图谱O-聚糖位点对依那西普进行LC-MS分析。浙江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

而用其他岩藻糖酶处理部分去除岩藻糖或根本没有去除。浙江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

C1抑制剂的去糖基化：在O-糖基化生物制药的生产过程中，由于he心GalNAc残基的加工不完全，可能会出现Tn抗原。这表现为具有 203 Da HexNAc 单位差异的重复质量位移。为了确认 Tn 抗原的存在，可以应用以下工作流程，此处在重度（26 个位点）O-糖基化 C1 抑制剂上演示。首先，使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖，使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能测试 ：依那西普是另一种具有挑战性的生物制药模型分子，携带 13 个 O-聚糖位点，其中平均 9 至 10 个位点被占用。浙江N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究