江西冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

genovis分析依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖：为了确认依那西普和曲妥珠单抗中半乳糖损失的LC-MS数据，进行了释放的N-聚糖分析。标记的N-聚糖的分离清楚地表明了依那西普和曲妥珠单抗上半乳糖的丢失，如半乳糖基化聚糖物种的信号丢失所示。该酶是一种有价值的工具，可降低样品异质性，用于分析携带α连接的 GalNAc 残基作为未成熟截短he心 1 的复杂 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-连接的 GalNAc；2. 实现完全糖基去除，以改善蛋白质表征；3. 可固定在即用型离心柱中。GalactEXO微离心柱经过格式化，可在30-60分钟内水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。江西冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性，因此需要在开发和生产过程中进行表征和监测。常见的聚糖分析工作流程是用PNGase F释放N-聚糖，然后用荧光标记物（如2-AB、2-AA、普鲁卡因胺或RapiFluor-MS™（沃特世公司））标记生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛细管电泳分离标记的聚糖，以表征和定量不同的聚糖结构。 在这里，使用游离聚糖方法分析zhiliao性抗体曲妥珠单抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠单抗和依那西普在天然条件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小时，而RNase B需要变性和还原才能完全去糖基化。因此，在50°C下用PNGase F去糖基化10分钟之前，用RapiGest™ SF表面活性剂（沃特世公司）和TCEP处理RNase B。 用RapiFluor-MS标记所得游离的聚糖，并通过HILIC UPLC-FLD-MS进行分析。江西冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究N-聚糖在内质网zhong共翻译地连接到未折叠的蛋白质上；

Genovis的SialEXO固定化用于复杂糖蛋白的去唾液酸化：在设置反应条件时，需要在所需的反应时间和完成反应所需的酶量之间进行权衡。较高的酶量可保证在更短的时间内完成周转，但会使下游分析复杂化。为了避免此类问题，我们以离心柱形式固定了活性SialEXO。这允许以更短的孵育时间孵育具有明显更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis测试了 SialEXO 冻干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制剂上的性能。这种糖蛋白是一种具有挑战性的底物，具有 6 个 N- 和多达 26 个 O-聚糖，由 α2,3 和 α2,6 连接的唾液酸修饰。对游离的N-聚糖的分析表明，SialEXO在溶液中完全脱唾液酸化，SialEXO固定化。

生成携带 O-糖的糖肽，该酶可实现 O-糖谱分析、O-糖肽图谱和位点占用测定，以及使用 MS 分析的中级方法。1.可靠O-聚糖特异性蛋白酶 – 消化丝氨酸/苏氨酸糖基化位点的 N 末端；2.稳健的消化，增强复杂生物制药的表征；3.高特异性 - 可靠的聚糖位点测定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化携带he心1 O-聚糖的蛋白质，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 残基的 N 端。OpeRATOR 来源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表达。大肠杆菌。该酶含有 His 标签，分子量为 42 kDa。SialEXO 来源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表达。大肠杆菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 标签，这些组分的分子量分别为 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的冻干酶。Genovis的OpeRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。SialEXO用于OpeRATOR或OglyZOR消化前预处理O-糖基化蛋白。

SialEXO 2-3 在天然条件下水解糖蛋白，在 pH 值范围为 7.0 至 9.0 时显示出活性。该酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。该酶具有 His 标签，分子量为 66 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高用于离心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化离心柱含有与琼脂糖珠共价偶联的SialEXO酶，用于糖蛋白的去唾液酸化，而不会被酶污染z终制剂。它水解天然糖蛋白上的唾液酸（α2-3、α2-6 和 α2-8）并释放出聚糖。效率；3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。ImpaRATOR 是一种 O-糖依赖性蛋白酶，可消化携带粘蛋白型O-聚糖的蛋白。江西冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。江西冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究

Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体：唾液酸是带负电荷的糖残基，存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化，从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. 样品中不含酶。因此，唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法，可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。江西冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病机理研究