上海国产数字PCR原理

定量PCR和数字PCR的特点：

1. 在20多年的使用和发展中，定量PCR作为一种技术平台，已经产出海量的数据，在工业界和分子检测的某些应用上，定量PCR已经成为“金标准”。基础研究方面，则形成了被称为MIQE的“定量PCR标准实验指南”。   

2. 在定量PCR的各种应用中，基因表达分析(gene expression analysis)的应用比重约占七成，综合各种因素来看，眼下定量PCR还是进行基因表达研究的理想手段。   

3. 上述的“各种因素”具体展开，主要包括：通量、自动化程度、各种检测探针与染料、检测通道、成本和可参考文献与protocol的数目等等。   

4. 就目前市场上已有的数字PCR设备来看，定量PCR在检测的线性范围上具有优势，意味着同一个run内可对各种表达丰度的样品进行分析。

       要了解为什么传统 PCR 存在限制，务必要了解 PCR 反应过程中发生了什么。基本 PCR 运行可以分为三个阶段：

指数期

       每个循环积聚的产物准确加倍（假定 ** 反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。

线性期（高变异性）

       随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的 PCR 产物不再加倍。

平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）

       反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR 产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统 PCR 进行测量，又称为终点检测。 上海国产数字PCR原理样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定。

研究方向

       低丰度及稀有序列的精确定量

       目前对于低丰度目标序列的检测，定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰，使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下，其重复性就不是很高)， 而微滴式数字PCR系统通过**的微滴  化处理，使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来，从而提高了检测的灵敏度及重复性。

       此外，由于样品微滴化处理的同时，也将样品中可能存在的***剂进行了分装，提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度，因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言，毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。

相对于二代测序、基因芯片和定量PCR而言，数字PCR具备以下优势:

● 灵敏度可达到单个核酸分子：检测限低至0.001%，主要系为数字PCR可以实现靶标DNA/RNA的生物浓缩；

● 无需标准曲线活参照基因进行对比来测定核算量，可对靶分子起始量进行***定量，直接独处DNA分子的个数；

● 适合环境复杂样品的检测：终点PCR检测，不依赖Ct值，不依赖扩增效率，能克服PCR***剂的影响，避免样品间的交叉***问题，适合各类复杂环境中的样本进行***定量，如动血样、粪便、尿液、痰液、水样、土壤、植物等； MicroDrop™数字PCR是拥有完全自主知识产权的微滴式数字PCR仪。

       数字PCR也叫Digital PCR（dPCR），是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说，数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值，不受扩增效率的影响，能够直接读出DNA的分子个数，能够对起始样本核酸分子***定量。

       数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份，然后再将其分配到不同的反应单元中，使每个微滴单元包含一个或多个拷贝的核酸分子（即DNA模板），每个单元都会对目标分子进行扩增，然后再对每个单元进行荧光信号的统计并计算。相对而言，传统PCR或qPCR反应都是发生于同一体系当中，这也是数字PCR与其比较大的区别。 采用有限稀释的方法将目标分子分割到**的反应体系中。上海国产数字PCR原理

MicroDrop™数字PCR可广泛应用于科研、医疗、出入境检验检疫等领域。上海国产数字PCR原理

       MiniDrop数字PCR仪由Creator微滴生成仪、Detector微滴检测仪、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter数据分析软件组成，该系统的**为微流控微滴生成技术，采用原创性的油液，在40um微管道中利用气压驱动在2分钟内生成50万微滴，单次运行生成400万微滴，微滴体积达皮升级，检测线性范围达到5个数量级，各项指标均超越国内外的主流产品。

       MiniDrop创新性采用高压驱动的方法将样本分割成50万份，打破了国外厂商在微滴式数字PCR领域的垄断。 上海国产数字PCR原理

浚和（上海）仪器有限公司是一家供应国内外先进仪器和设备的专业供应商和服务商，致力于为客户提供专业的定制化解决方案。多年来，持续为医药、化工、高校、科研单位、检测院等多个行业提供先进的产品和专业的服务。

浚和在不断引进国内外先进仪器设备的同时，结合行业和市场需求，加强和客户之间的沟通，并与国际上多家**仪器设备制造商保持着长期稳定的合作关系，不定期地与合作商进行技术交流，努力加强自身技术力量。公司配备了数名有着多年行业经验的技术人员，依靠雄厚的技术实力、科学合理的配置方案、专业的安装调试和周到的售后服务，得到了广大用户的支持与信赖。

公司主要经营产品包括：等离子清洗机、真空泵、喷雾干燥器、数字PCR、高压灭菌锅、培养箱、切片机、水分测定仪、激光粒度仪、光谱仪、温湿度记录仪等，目前主要合作品牌有：日本雅马拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、广州永诺 、日本KEM等。同时，公司还提供专业的技术服务，如设备的维护、验证等。

浚和仪器将始终以行业特点为立足点，以客户需求为导向，不断地提高自身专业技术能力，不停地完善客户服务质量，在发展中保持创新的精神，力求与客户共同进步，为行业的发展作出不懈的努力。