Recombinant Rat BD-3
提取的DNA质量评估通常涉及以下几个方面:1.**纯度评估**:-**分光光度法**:通过测量DNA样本在260nm和280nm处的吸光度(OD值)来评估DNA的纯度。纯度可以通过OD260/OD280的比值来评估,对于纯DNA,这个比值通常在1.8左右。如果比值低于1.8,可能表明存在蛋白质污染;如果高于1.9,则可能存在RNA污染。此外,OD260/OD230的比值可以用来评估盐离子等杂质的残留,纯DNA的比值应在2.0-2.2之间。-**琼脂糖凝胶电泳法**:通过电泳分离DNA片段,根据DNA在凝胶上的迁移情况来评估其纯度。如果泳道口中存在较亮的条带,可能表明存在蛋白污染。2.**浓度评估**:-**紫外分光光度计**:使用紫外分光光度计测定DNA在260nm处的吸光度,根据比尔-朗伯定律(Beer-Lambertlaw)计算DNA的浓度。对于纯DNA,OD260的读数为1.0时,大约相当于50μg/mL的双链DNA。-**荧光定量法**:使用荧光染料结合DNA,通过测量荧光变化来定量DNA。这种方法比紫外分光光度法更敏感、精确,并且可能对特定的核酸有特异性。
磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒与传统纯化方法相比具有以下优势:1.**操作简便快捷**:磁珠法纯化过程通常可以在15分钟内完成,包括结合、洗涤和洗脱步骤,无需复杂的离心或抽滤操作。2.**高纯度和高回收率**:磁珠法纯化得到的DNA纯度高,通常回收率可以达到90%以上,适用于100bp以上的DNA片段的纯化,对达到10kb片段DNA的纯化也能保持较好的效果。3.**适用性广**:磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒适用于多种样本类型,包括PCR产物、酶切产物、连接产物等,也适用于低浓度样品的浓缩。4.**安全性高**:操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂,更加环保和安全。5.**灵活性**:可以根据实际状况灵活调节磁珠用量,适应不同体积和浓度的样品处理。6.**自动化和高通量**:磁珠法纯化试剂盒适合手工操作,也可用于自动化工作站或核酸自动提取仪,实现高通量操作。7.**温和的条件**:磁珠法条件温和,对DNA的损伤小,适合后续的多种分子生物学实验,如酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等。8.DNA片段适应性**:适用于从150bp到50kb的DNA片段的纯化,能够满足大多数分子生物学实验的需求。
Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一种从嗜热脂肪芽孢杆菌(Thermophilic Geobacillus sp)DNA聚合酶I衍生的酶,缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是关于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些关键信息:来源和特性:Bst Plus DNA Polymerase 具有更强的5'-3' DNA聚合酶活性、链置换活性和dUTP耐受性,适合用于抗污染的等温扩增反应,如LAMP和CPA等。应用:主要应用于等温DNA扩增,包括环介导等温扩增(LAMP)和其他等温扩增技术。规格:活性定义:1 U指的是在65°C下30分钟内将10 nmol的dNTP整合到酸不溶物质中的酶的量。溶液成分:包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油,pH 7.5 @ 25℃。产品形式:提供的产品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),货号14402ES,以及冻干粉形式的产品,货号14405ES,不含甘油。灵敏度和稳定性:Bst Plus DNA Polymerase 具有高灵敏度,低至5copies目的基因可测,且在飞克(fg)级别的模板量下也能快速达到阈值。在37°C下,该酶可以保持相对稳定的效应长达5天,并且在-20℃下可以稳定保存2年。储存条件:建议在-25℃至-15℃下储存,以保持产品活性,并避免反复冻融。
T5核酸外切酶在基因编辑中确实有应用,并且具有一些优势:1.**提高编辑效率**:根据一篇研究文章,T5核酸外切酶可以与CRISPR/Cas系统共表达或融合,以提高基因编辑的效率。这种共表达或融合可以增加indel(插入和缺失)频率,尽管增加的幅度可能不大。2.**增强基因编辑效果**:在另一项研究中,通过使用螺旋-螺旋二聚体肽(coiled-coilpeptides)将T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上,可以提高基因编辑的效率,这种方法被称为CCExo(CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease)。这种招募方式优于共表达和直接融合,其中强的亲和力CC对显示出高的突变频率和删除长度。3.**应用于多种细胞类型**:CCExo系统在多种细胞系和原代细胞中都能有效地提高基因失活效率,并且在慢性髓性白血病(CML)患者的原代细胞以及异种移植动物模型中展示了其应用潜力,这表明CCExo方法可能成为CML和其他遗传性疾病的潜在选择。T5核酸外切酶与CRISPR核酸酶蛋白进行融合,并引入了核定位信号(NLS)序列以构建表达载体,用于基因编辑。综上所述,T5核酸外切酶在基因编辑中的应用可以增强编辑效率和效果,尤其是在与CRISPR/Cas系统结合使用时。在这个过程中,E1使用ATP的能量,在自身的活性位点的半胱氨酸残基与泛素C末端的甘氨酸残基形成硫酯键。
BstDNAPolymerase,LargeFragment(嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶大片段)是一种常用于分子生物学实验的酶,特别是在等温DNA扩增技术中。以下是一些关于BstDNAPolymerase,LargeFragment的关键信息:1.**来源**:这种酶来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus),是一种热稳定的DNA聚合酶。2.**活性**:BstDNAPolymerase,LargeFragment具有5'到3'的DNA聚合酶活性,并且具有链置换活性,这使得它能够用于等温扩增反应,如环介导等温扩增(LAMP)。3.**热稳定性**:由于其嗜热特性,BstDNAPolymerase,LargeFragment能够在较高的温度下保持活性,通常在60-65°C。4.**应用**:-**等温扩增**:用于LAMP和其他等温扩增技术,这些技术不需要传统的热循环仪。-**全基因组扩增**:用于快速扩增少量DNA样本,以进行进一步的分析。-**突变检测**:在某些情况下,用于检测特定基因的突变。5.**优点**:-**高保真度**:与某些其他DNA聚合酶相比,BstDNAPolymerase,LargeFragment具有较高的保真度。-**快速扩增**:等温扩增技术可以在短时间内快速产生大量DNA。FnCas12a需要一个crRNA,而不需要tracrRNA,简化了RNA的设计和构建过程。Human MCP-3/CCL7
研究表明,优化后的Cas12a系统在多种细胞类型中表现出良好的编辑效率。Recombinant Rat BD-3
BsuDNAPolymerase(嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶)与其他DNA聚合酶相比,具有一些独特的特性和优势:1.**链置换活性**:BsuDNAPolymerase保留了BacillussubtilisDNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺乏5'→3'核酸外切酶结构域,这使得它具有链置换DNA合成的能力。这种能力对于等温扩增技术如重组酶聚合酶扩增(RPA)和环介导等温扩增(LAMP)非常重要,因为它可以分离双链DNA,允许新的DNA链的合成。2.**温度稳定性**:BsuDNAPolymerase在高温下保持活性,这使得它适用于需要在较高温度下进行的扩增反应,如RPA技术中的65°C反应条件。3.**无核酸外切酶活性**:BsuDNAPolymerase缺乏3'→5'和5'→3'核酸外切酶活性,这意味着它不会像某些其他聚合酶那样在合成过程中具有校对功能。这可以减少非特异性扩增,提高扩增的特异性。4.**高灵敏度和特异性**:BsuDNAPolymerase在等温扩增中展现出高灵敏度,能够将微量核酸模板扩增到可检测水平,同时保持高特异性。5.**简化的操作流程**:与其他需要复杂操作和多个步骤的DNA聚合酶相比,BsuDNAPolymerase在等温扩增技术中的应用简化了操作流程,因为它不需要热循环仪,这使得它适合现场快速检测和诊断。