固氮螺菌培养基
细菌培养基之根瘤菌培养基:葡萄糖10g,磷酸氢二钾0.5g,碳酸钙3g,硫酸镁0.2g,酵母粉0.4琼脂20g,水1000ml,1%结晶紫溶液1ml。先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。放线菌培养基:(1)淀粉硝酸盐培养基(高氏一号培养基)可溶性淀粉2.0g,硝酸钾0.1g,磷酸氢二钾0.05g,氯化钠0.05g,硫酸镁0.05g,硫酸亚铁0.001g,琼脂2g,水100ml。先把淀粉放在烧杯里,用5ml水调成糊状后,倒入95ml水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.2-7.4,分装后灭菌,备用。Hoyle培养基基础 VM培养基 羧甲基纤维素钠(CMC)液体培养基 YSG液体培养基基础 蔗糖硫胺培养基。固氮螺菌培养基
培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。四号琼脂基础/4号琼脂基础NGKG琼脂基础 酪蛋白琼脂 酚红葡萄糖肉汤 溶菌酶营养肉汤基础 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤(TSPB)基础。
动物细胞培养必需的溶液,平衡盐水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羟乙基哌嗪乙烷磺酸)细胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液。1)青、链霉素,每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素。2)卡那霉素:终浓度为50ug/ml培养液。3)制霉菌素:浓度25U/ml,小瓶分装,每瓶一次用完。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清,前者来源少,价格高;后者要求刚产下尚未哺乳的小牛,因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。
还有一些鉴别性培养基,是利用细菌特有的各种酶系统,能分解利用各种特定的糖、醇、氨基酸或其他基质而产酸、产气、产碱或产生其他可见物质,依此进行细菌的鉴别,例如常用的生化培养基。用于细菌生化特性试验的培养基特点是在无糖的基础培养基中加人某种特定的基质,并加人指示剂,细菌在此类培养基中的一系列生化反应结果,均通过指示剂显示出来。此类培养基为生化反应鉴别培养基。根据用量又可分为常量生化培养基和微量生化培养基。值得注意的是生化试验培养基的某些成分受高温、pH等诸多因素的影响,在配制和使用时,应根据实际情况严格掌握,防止有效成分被破坏,以保障其使用效果。M-肉汤 SCCRAM 肉汤 缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤(EE肉汤) V-B培养基E 柠檬酸铁培养基 细菌L型增菌培养基。
在培养基中加入 HEPES 有何好处?培养基中常用的缓冲体系是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理 pH 条件下会降低缓冲能力。而HEPES 是一种很强的缓冲剂,能使细胞培养基在 pH7.2-7.6 条件下缓冲能力增强。HEPES溶液:是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动。在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了 5%CO2 的环境,CO2 气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。神经细胞原代培养的过程中能用到。有机磷细菌培养基不含琼脂 细胞壁缺陷型细菌培养基YPG培养基有机磷细菌培养基肉汤培养基(测磷细菌菌数)。BCYECys琼脂基础
使用说明称取本品21.5g于1L蒸馏水或去离子水中加热煮沸至完全溶解分装115℃高压灭菌30分钟冷却备用.固氮螺菌培养基
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