云南二代测序应用

二代测序——转录组测序的实验流程（下）测序根据研究需求和预算选择合适的测序平台，如Illumina测序平台。它的测序原理主要是边合成边测序（SBS）。在测序过程中，dNTP（脱氧核糖核苷三磷酸）带有不同颜色的荧光标记，当新的dNTP加入到正在合成的DNA链时，通过检测荧光信号来确定碱基类型，从而读取cDN**段的序列。测序深度（覆盖度）也是一个重要参数，一般来说，测序深度越高，检测到的低表达转录本的概率就越大，但成本也会相应增加。数据分析数据质量控制是第一步，要去除低质量的reads（如含有较多不确定碱基“N”的reads）和接头序列。然后将高质量的reads比对到参考基因组或转录组上，常用的比对软件有TopHat、STAR等。在确定了reads的位置后，就可以计算转录本的表达量，常用的方法有RPKM（ReadsPerKilobaseofexonmodelperMillionmappedreads）、FPKM（FragmentsPerKilobaseofexonmodelperMillionmappedfragments）等。此外，还可以进行差异表达分析，找出在不同样本条件下（如疾病组和健康组）表达量有***差异的转录本，用于后续的功能注释和通路分析，了解这些转录本可能参与的生物学过程和信号通路。二代测序是2005年以后开始的吗？云南二代测序应用

转录组测序的主要测序对象包括以下几类（下）：

长链非编码RNA（lncRNA）：lncRNA长度较长，具有多种生物学功能，如参与基因表达调控、染色质修饰、转录因子活性调节等。转录组测序有助于发现和鉴定新的lncRNA，并分析其在不同组织和细胞中的表达模式及功能机制。其他RNA

环状RNA（circRNA）：circRNA是一类特殊的非编码RNA，呈环状结构，具有稳定性高、不易被降解等特点。转录组测序可以检测circRNA的存在和表达水平，研究其在基因表达调控、细胞信号转导以及疾病发***展中的作用。

小核RNA（snRNA）和小核仁RNA（snoRNA）：snRNA主要参与真核生物mRNA的加工过程，如mRNA的剪接等；snoRNA则主要参与rRNA的加工和修饰。转录组测序可以对它们的表达和功能进行研究，以揭示其在细胞内的作用机制。 广东哪里有二代测序原理二代测序通量大，可以产生上G的reads.

二代测序在代谢组的发展趋势

深度整合多组学：未来会更加紧密地把二代测序相关的多组学（转录组、表观基因组等）与代谢组学进行整合，构建更为***的生物系统模型，不仅可以更好地阐释复杂生命现象和疾病发***展机制，还能助力药物研发、精细农业等应用领域的发展。

技术协同优化：持续改进二代测序技术和代谢组分析技术，提高各自的灵敏度、准确性和通量，并且促使两者在实验流程设计、样本处理等方面更加适配，便于更高效地联合开展研究，为深入探索生命奥秘提供更有力的支撑。

二代测序的建库步骤④四、接头连接接头选择：根据测序平台的要求选择合适的接头。不同的二代测序平台（如Illumina、IonTorrent等）有各自特定设计的接头。这些接头包含与测序平台的流动池（flowcell）表面互补的序列，用于将DNA片段固定在测序芯片上，还包含用于区分不同样本的索引序列（index）等。连接反应：使用DNA连接酶将接头与DNA片段连接。T4DNA连接酶是常用的连接酶，它可以在ATP（三磷酸腺苷）存在下，将接头的5'-磷酸基团与DNA片段的3'-羟基形成磷酸二酯键，从而将接头连接到DNA片段的两端。连接反应的条件（如温度、连接酶的用量、反应时间等）需要根据具体的实验要求进行优化，以确保较高的连接效率。二代测序的优势是低成本。

二代测序技术的一些研究进展②植物基因组学研究领域：花生四倍体野生种基因组测序：河南农业大学殷冬梅教授团队和上海交通大学韦朝春教授团队联合发布了花生四倍体野生种近乎完整基因组amon2.0版本。该研究结合ONT超长读段、二代测序和Hi-C等多种测序技术，使基因组的连续性、完整性和准确性都得到了显著提高，为花生的遗传驯化和分子育种提供了重要的基因组数据信息资源。长雄野生稻基因组解析：中科院昆明动物所王文研究组与云南省农科院粮食作物研究所胡凤益研究组等中外机构合作，利用二代测序技术成功组装出高质量的长雄野生稻基因组，并对其与近缘物种的分歧时间、基因的收缩扩张等进行了分析，还鉴定出一批可能影响地下茎以及自交不亲和性状的候选基因及代谢途径，为解析相关分子机制提供了重要线索。二代测序是先打断DNA，使其片段化。上海哪里有二代测序检测

二代测序广泛应用于基因组学研究。云南二代测序应用

二代测序在代谢组研究中的应用途径②

调控元件测序辅助代谢组分析

原理：除了对编码基因的转录组测序外，二代测序还可用于分析非编码RNA（如miRNA、lncRNA等）以及基因的调控元件（如启动子、增强子等）。miRNA可以通过与靶mRNA结合抑制其翻译或促使其降解，间接调控代谢相关基因的表达，从而影响代谢组的构成。启动子等调控元件的甲基化状态等表观遗传变化也会改变基因的转录活性，**终对代谢过程产生作用。

案例：在**代谢研究中，通过对**组织和正常组织的miRNA测序，发现特定miRNA在**组织中表达异常。进一步研究表明该miRNA可靶向调控参与葡萄糖代谢的关键酶基因，使得肿瘤细胞中葡萄糖代谢模式发生改变，代谢组分析也证实了相关糖类代谢物的异常积累，为揭示肿瘤细胞独特的代谢特征提供了线索。 云南二代测序应用