湖南培养基常用知识

    拟南芥根愈伤**诱导时，培养6-9d在切口处开始出现少量颗粒状愈伤**，培养20-22d获得淡黄色松脆型愈伤**，在愈伤**周围观察到大量致密分布的白毛，颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100％。如图5所示。培养实例5和对比培养例5的诱导结果比较：用上述方法进行哥伦比亚拟南芥叶片和根愈伤**诱导时，cs诱导培养基与ms诱导培养基的颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100％，但cs诱导培养基的愈伤**出愈时间比ms诱导培养基提前至少1d；在相同培养条件下，与ms诱导培养基相比，经cs诱导培养基诱导的叶片团块状愈伤**更大、诱导的根愈伤**更多。如图5所示。培养实例6：本氏***叶片及根愈伤**诱导培养实例6与培养实例5不同的地方在于，步骤(1)将；步骤(2)将2,；步骤(3)所取叶片为本氏***无菌苗叶片，用手术剪刀将无菌叶片剪成，用镊子将其平铺于诱导培养基；步骤(4)所取根为本氏***无菌苗的根，cs诱导培养基的诱导结果为：本氏***叶片愈伤**诱导时，培养15-18d的叶片明显增大增厚，叶片四周产生大量的淡绿色致密的愈伤**，愈伤**诱导率为100％，且在愈伤**团块上已开始产生多个嫩绿色的不定芽；本氏***根愈伤**诱导时，培养9-11d在切口处产生大量淡黄色致密的愈伤**。F12培养基适用于多种类型的细胞培养实验。湖南培养基常用知识

    发酵培养基为：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，cecl30-40mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；发酵工艺同实施例1，100l发酵罐中含有70l发酵培养基。设置cecl3的添加浓度为0，，如图1-2所示，随着cecl3添加量的增加，菌体浓度和谷氨酸含量均有所提升，当添加量为10mg/l时，菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值，然后出现下降趋势，但是整个过程中，糖酸转化率没有明显改变（附图未显示）；说明cecl3稀土盐能够促进菌株增殖，提高谷氨酸相关合成酶的活力，提高谷氨酸的产量，但是过高的浓度会造成菌株增殖放缓和死亡，谷氨酸产量相应下降。二、通过上述实验确定cecl3添加量为10mg/l，在此基础上，研究2-羟基乙胺对菌体浓度、谷氨酸含量以及糖酸转化率的影响。设置2-羟基乙胺的浓度为，5,10,20,40,80,160mg/l，如图3-4所示，随着2-羟基乙胺添加量的增加，菌体浓度随之增加，相应地，谷氨酸含量和糖酸转化率也有所提升，当添加量为40mg/l时，菌体浓度和谷氨酸含量达到峰值，继续增加2-羟基乙胺的浓度，产生明显的抑菌效果，菌株密度下降明显；原因是，低浓度的2-羟基乙胺可能促进磷脂酰乙醇胺细胞壁组分的合成。基础培养基包括F12培养基在组织工程和再生医学中有广泛应用。

    4、本发明植物**培养基，其不含碘化钾，在绝大多数植物中，碘元素不是必需元素，实验发现去除碘化钾对植物**培养没有影响，并且植物在脱离培养基进行后期培养时仍可以从土壤等基质中富集碘元素，去掉碘化钾成分，也简化了培养基配制过程。5、本发明植物**培养基，其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o，该替换减少的**根离子通过适当增加**铵成分来补充，该替换主要基于两个特征，一方面，nafeedta是可溶性螯合铁，更容易被植物吸收，有利于植物叶绿体发育，另一方面，发明人发现，na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等众多植物**培养基原始ph偏低及ph波动大的主要原因，本发明培养基中使用nafeedta之后，经ph为，而植物**适宜生长的ph一般为，因此，使用nafeedta既促进了植物对铁离子的吸收，又有利于培养基ph的稳定。6、本发明植物**培养基，其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量，增加了cuso4·5h2o、烟酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇的用量，该改变特征在于，有效减少愈伤**玻璃化发生，减少酚类物质产生，提高愈伤**的出愈率，实验发现，优化后的培养基出愈时间提前，对多种植物的愈伤**诱导是有益的。

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    7)溶液应在2℃－8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。2）配制可高压**细胞培养基(1)根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分钟。(3)待溶液冷却至室温，加入无菌mol/LL－谷氨酰胺溶液规定体积、无菌％（w/v）碳酸氢钠溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。(4)如果必要，用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。(5)溶液应在2℃－8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。注意事项1）细胞培养用水一般为三蒸水（经石英蒸馏器蒸馏）或超纯水，医*生产上一般为注射用水。2）建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用，因为包装一旦打开，组分可能会变质或因受潮而结团。3）溶解干粉培养基时先加入终体积90％－95％的培养用水，添加剂加完后再补足。4）如需添加的组分较多时，某一组分完全溶解后，再添加另一组分。5）待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠，以免产生沉淀。6）所有成分完全溶解后，培养基应立即过滤或高压**，以免产生沉淀或有微生物污染。7）在过滤**时。无酚红培养基适用于对酚红敏感的细胞实验。基础培养基包括

使用减血清培养基能减少实验的变异性。湖南培养基常用知识

    可通过在细胞培养基中添加一些保护剂，降低细胞-气体和细胞-液体的表面张力，减少气泡的形成。4.细胞培养基的**及储存**方式及注意事项细胞培养基**的方式分为高压**和膜过滤**，不同的培养基由于其营养成份不同，**方式也可能不同。①高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压**后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，不需将**时间延长。绝大多数细胞培养基不适宜高压**。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用过滤消毒以除去**。可供过滤**使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。膜过滤**是当前较为常用及便捷的一种方法，常采用μm孔径的滤膜，部份采用μm孔径。与高压过滤方式相比，滤膜具有使用期限且价格较高，但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。通常液体细胞培养基避免-20℃冻存。湖南培养基常用知识