北京MEM a培养基常用知识

    按中华******典2005年版二部附录ⅧL干燥失重测定法进行。渗透压溶剂通过半透膜由低浓度向高浓度溶液扩散的现象称为渗透，阻止渗透所需施加的压力，称为渗透压。细胞必须生活在等渗环境中，动物细胞借助K＋、Na＋维持渗透平衡。大多数细胞对渗透压有一定的耐受性。但是培养液渗透压过高容易使细胞脱水萎缩，培养液渗透压过低容易使细胞膨胀破裂，因此要控制培养基的渗透压范围。按中华******典2005年版二部附录ⅨG渗透压摩尔浓度测定法进行。**内*****内***是许多病原性**所产生的***。它的特殊性在于不是**或**的代谢产物，而是**死亡或解体后才释放出来的一种具有生物活性的物质。培养基**内***过高，对生物制品*苗（如狂犬、乙肝*苗）、基因工程*品等注射用的*品都需要检查**内***。因此本项目的检验符合生物制品质量控制要求。常规细胞培养基的**内***标准定为＜10EU/ml。称取本品规定量（见表4-12）的1/100，加入**内***检查用水10mL溶解，吸取该溶液mL加**内***检查用水mL，混匀即得试样。按中华******典2005年版二部附录ⅪE**内***检查法中的凝胶法进行。微生物限度细胞培养基不是无菌产品，其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖。MEM培养基适合多种类型的细胞培养实验。北京MEM a培养基常用知识

    无芽孢：E=209—250*103J/mol。显然，（5）式的比值〉1，说明提高温度对于第二个平行反应，即菌体死亡的反应是有利的。提高温度，虽然两个平行性反应的反应速度常数都提高了，但是，达到同样的**效果，所需要的时间却缩短了，由于***个反应也就是营养成分破坏的反应速度常速增加的少，因此，有利于减少培养基在**过程中营养成分的破坏。换言之，高温短时**对于培养基营养成分是有利的。通常所说的高温短时**可以提高生产效益，其理论根据就在于此。结论1：当**温度上升时，微生物杀死速率的提高要超过培养基成分的破坏速率的增加。要减少营养成分的破坏，可升高温度**。结论2：在**时选择较高的温度、较短的时间，这样便既可达到需要的**程度，同时又可减少营养物质的损失。（二）、影响**效果的因素（1）微生物种类：不同的微生物k值不同。（2）初始菌量：在保持N值不变的前提下，t与初始菌量N0的对数成正比。（3）培养基成份：油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。(4)传热与混合状况：影响受热均匀度。(5)培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。(6)蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和**温度。(7)pH：酸性pH下可加快微生物热死速率三、培养基的工业**。北京MEM a培养基常用知识无血清培养基为细胞培养提供了纯净的背景。

    水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，含丰富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成（采用平衡盐溶液溶解）与合成培养基（如MEM细胞培养基）以1:1的比例混合使用。目前用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、***、无机物等，这些物质对促进细胞生长或**生长活性是达到生理平衡的。此外，血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、*****等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。目前，血清多作为一种添加成分与合成培养基混合使用，使用浓度一般为5~20%，**常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份复杂，批间差异大及存在**等外源污染风险，对下游生物制品的分离纯化和安全性都存在较大的影响，在生物制*行业的使用也越来越少。因此，基于对血浆成份的分析，合成细胞培养基应运而生。合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。

    在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中培养，诱导培养基的配方为ms+，诱导培养基的ph值为，在s4中，将s3中的无菌外植体转接到增殖培养基中，增殖培养基的配方为ms+～～，增殖培养基的ph值为，在s5中，将s4中的绣球组培苗放入生根培养基中，生根培养基的配方为1/2ms+～～，生根培养基ph值为。通过采用上述技术方案，通过液体**培养技术，以芽为原材料，获取方便，增殖倍率高达8～10倍，生根率达到95％以上，苗木规格整齐，性状保持稳定，同时节省成本，适合工厂化大规模生产质量绣球种苗。诱导培养基萌芽率能达到90％，可以成功建立无菌再生体系。使用本增殖培养基，绣球组培苗增殖倍率能够达到8～10倍，组培苗高度一致，生长健壮。使用本生根培养基，绣球组培苗生根率能够达到95％，根系发达，健壮，可以成功用于移栽大棚。本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：在s3中，将s2中消毒的外植体接入诱导培养基中后的培养环境为在光照强度1500lux条件下，温度25℃，光照时间16h；黑暗条件下，温度23℃，光照时间8h，培养6～8周。通过采用上述技术方案，在该培养条件下能够有效避免诱导培养阶段植物材料出现应激反应，植物材料能够快速适应诱导培养基。使用减血清培养基能提高实验的可重复性。

    微量元素在细胞内通常以与有机物结合的形式存在。其中铁在细胞中参与氧的转运；钴是维生素B12的组成部分，参与叶酸的合成和脂肪酸的合成；镍能够***脱氧核糖核酸酶、乙酰辅酶A合成酶等在细胞内具有重要功能的酶，还具有稳定核酸结构的功能；亚硒酸钠中的硒，作为谷胱甘肽过氧化物酶的辅基，具有抗过氧化物能力，参与消除细胞内的脂肪酸过氧化物，提高细胞的生长速率和活性。在低血清、无血清细胞培养基中，为满足细胞生长增殖需要，常常添加一些成份：蛋白质、多肽、核苷、嘌呤、柠檬酸循环的中间产物、脂类、及一些血清替代因子等。其中蛋白质具有重要的作用，动物细胞对许多物质（难溶于水的离子或脂类物质）的摄取需要借助蛋白质的传递作用，如白蛋白、传递蛋白、贴壁蛋白等能够携带脂肪酸、***、矿物质等促进细胞生长。转铁蛋白是一种重要的传递蛋白，能够结合铁，促进细胞对铁离子的吸收，并具有***作用，其促生长作用可能与其具有生长因子的功能有关。胰岛素可促进细胞对葡萄糖和氨基酸的利用，商业化中一些生长因子以重组蛋白形式添加到培养基中，主要用来刺激细胞增殖，并可促进糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一种重要的刺激细胞生长的化合物，是脑磷酸的合成前提。无血清培养基确保了实验结果的高度准确性。河南F12培养基供应商

RPMI1640培养基提高了细胞的存活率和生长速率。北京MEM a培养基常用知识

    7)溶液应在2℃－8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。2）配制可高压**细胞培养基(1)根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分钟。(3)待溶液冷却至室温，加入无菌mol/LL－谷氨酰胺溶液规定体积、无菌％（w/v）碳酸氢钠溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。(4)如果必要，用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。(5)溶液应在2℃－8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。注意事项1）细胞培养用水一般为三蒸水（经石英蒸馏器蒸馏）或超纯水，医*生产上一般为注射用水。2）建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用，因为包装一旦打开，组分可能会变质或因受潮而结团。3）溶解干粉培养基时先加入终体积90％－95％的培养用水，添加剂加完后再补足。4）如需添加的组分较多时，某一组分完全溶解后，再添加另一组分。5）待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠，以免产生沉淀。6）所有成分完全溶解后，培养基应立即过滤或高压**，以免产生沉淀或有微生物污染。7）在过滤**时。北京MEM a培养基常用知识